Acute-phase protein profile in horses subjected to different exercise protocols.

High-intensity exercise can be associated with the occurrence of muscle injury, as well as the induction of an acute-phase response (APR). The present study aims to investigate the synthesis and profile of serum proteins in horses before and after participating in 2 different exercise protocols and to relate this profile to the presence or absence of muscular injury caused by exercise. Ten purebred Arabian (n = 5) and Criollo (n = 5) horses were subjected to 2 different tests on a treadmill, one consisting of short-duration and rapid-acceleration training (TRA) that was mostly anerobic and the other of long-duration and slow-acceleration training (TLD) that was predominantly aerobic. Blood samples were obtained before the beginning of exercise (T0) and at 6 post-exercise time points: immediately after (T1) and 30 min (T2), 3 h (T3), 12 h (T4), 24 h (T5), and 48 h (T6) after exercise. Hematocrit was determined by the microhematocrit method. Plasma and serum samples were prepared by centrifugation (1500 × g for 5 min) for plasma concentrations of fibrinogen, total serum proteins (TP), sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), and creatine-kinase (CK) serum activity. Total protein concentration and CK serum activity were determined in an automated biochemistry analyzer. Fibrinogen was determined by the heat precipitation method in microhematocrit capillary tubes. Estimated concentrations of haptoglobin (Hp) significantly decreased after TRA and estimated concentrations of alpha-1 acid glycoprotein (AGP) significantly increased after both protocols at T2. Albumin increased after the TLD exercise protocol. Changes in hematocrit, haptoglobin, and albumin concentrations in horses subjected to different treadmill exercise protocols are related to a physiological response to hemoconcentration and hemolysis. Increases of AGP in the TLD protocol suggest the release of catecholamines as a response to avoid oxidative damage to tissue.

L'exercice est associé à l'induction d'une réponse inflammatoire en phase aiguë (APR). La présente étude vise à étudier la synthèse et le profil des protéines sériques avant et après la mise en pratique de deux protocoles d'exercices différents, et à et à établir un lien entre ce profil à la présence ou à l'absence de lésions musculaires causées par l'exercice. Dix chevaux, de race pure arabe (n = 5) et criollo (n = 5), ont été soumis à des tests sur un tapis roulant d'accélération rapide et de courte durée, principalement anaérobique (TRA), et des exercices de faible intensité et de longue durée (TLD), principalement aérobique. Des échantillons de sang veineux ont été prélevés avant le début de l'exercice (T0) et à six moments post-exercice : immédiatement après (T1), 30 minutes (T2), 3 h (T3), 12 h (T4), 24 h (T5) et 48 h (T6). L'hématocrite a été déterminé par la méthode du microhématocrite. Des échantillons de plasma et de sérum ont été préparés par centrifugation (1500 × g pendant 5 min) pour les concentrations plasmatiques de fibrinogène, les protéines sériques totales (TP), l'électrophorèse sur gel de polyacrylamide de sodium dodécylsulfate (SDS-PAGE) et l'activité sérique de créatine kinase (CK). La concentration en TP et l'activité sérique en CK ont été déterminées dans un analyseur automatique de biochimie. Le fibrinogène a été établi par la méthode de précipitation thermique dans des tubes capillaires à microhématocrite. Les niveaux estimés d'haptoglobine ont diminué de manière significative en TRA et les concentrations estimées d'AGP ont été significativement augmentées pour les deux protocoles à T2. L'albumine a augmenté considérablement dans le protocole TLD. Les variations des concentrations d'hématocrite, d'haptoglobine et d'albumine chez les chevaux soumis à différents protocoles d'exercice sur tapis roulant sont liées à la réponse physiologique à l'hémoconcentration et à l'hémolyse. L'augmentation de l'AGP dans le protocole TLD suggère la libération de catécholamines et une réponse permettant d'éviter les dommages oxydatifs aux tissus.(Traduit par les auteurs).

Comparação entre duas metodologias para a realização do teste de redução do tetrazólio nitroazul (NBT) em caprinos / Comparison among two methodologys at realization nitroblue tetrazolium reduction test (NBT) in caprines

O teste de redução do tetrazólio nitroazul (NBT) é um dos métodos mais utilizados para a avaliação do metabolismo oxidativo dos neutrófilos. Porém, o custo por amostra e o tempo de utilização do corante são desvantagens do método. O objetivo deste trabalho foi comparar duas metodologias para realização do teste do NBT a fim de maximizar a sua utilização e diminuir o custo por amostra processada. Foram utilizadas 10 cabras, adultas clinicamente sadias e colhidas amostras de sangue por meio de venipunção jugular em tubos de 10mL sendo retirada uma alíquota de 500µL em tubo "eppendorff" contendo 2µL de heparina. Através desta alíquota foram realizadas três metodologias para o teste do NBT: A) técnica original Park & Good (1970); B) redução de 50% do volume do corante; C) redução de 50% e armazenamento do corante a -20°C por 180 dias. Foram confeccionados e corados esfregaços sanguíneos (May Grünwald-Giemsa) das amostras com as metodologias propostas e realizada contagem de 100 neutrófilos em microscopia óptica para determinar o percentual de neutrófilos reativos ao NBT. A análise estatística pelo método de Análise de Medidas Repetida (ANOVA) demonstrou diferenças significativas (P<0,05) entre os dois métodos e o original (A=14,4±4,6; B=1,9±1,4; C=1,1±0,9), porém apresentou alta correlação pelo teste de Spearman entre os métodos (rs=0,82 (AxB), rs=0,75 (BxC) e rs=0,93 (AxC)). Conclui-se que o teste de Redução do Tetrazólio Nitroazul (NBT) segundo a metodologia descrita por Park & Good (1970) e a redução do corante em 50% do seu volume e a sua redução associada ao congelamento por 180 dias a -20ºC podem ser realizadas em caprinos, porém os valores devem ser comparados com as respectivas metodologias utilizadas.(AU)

The nitroblue tetrazolium reduction test (NBT) is one of the most used methods to evaluate the oxidative metabolism of neutrophils. However, the cost for each sample and dye's life-time are disadvantages of the method. This paper aim was to compare two NBT test methodologies in order to maximize its use and decrease the cost for each sample. It was made using 10 adult and healthy goats and blood samples were taken through venipuncion in jugular vein, using 10mL tubes, and then a 500µL sample was taken in eppendoff tubes with 2µL of heparin. Using this sample were made three methodologies for the NBT test: A) Park & Good (1970) original technique; B) dye reduction in 50% of the volume; C) 50% reduction and dye storage at -20°C for 180 days. It was made and dyed the blood smear (May Grünwald-Giemsa) from the samples, using the proposed methodologies and then made the counting of 100 neutrophils in optic microscopy, to determinate the percentage of NBT reactive neutrophils. The statistic analysis by the method of Repeated Measuring Analysis (ANOVA) evinced significant differences (P<0,05) between the two methods and the original (A=14.4±4.6; B=1.9±1.4; C=1.1±0.9), however it showed high correlation by the Spearman test between the methods (rs=0,82 (AxB), rs=0,75 (BxC) e rs=0.93 (AxC)). It was concluded that the original Park & Good (1970) method and two methodologies for dye reduction in 50% and it's reduction associated with NBT dye freezing for 180 days can be used in caprines, but the values should be compared with their respective methodologies.(AU)

Comparação entre duas metodologias para a realização do teste de redução do tetrazólio nitroazul (NBT) em caprinos

Abstract: The nitroblue tetrazolium reduction test (NBT) is one of the most used methods to evaluate the oxidative metabolism of neutrophils. However, the cost for each sample and dye's life-time are disadvantages of the method. This paper aim was to compare two NBT test methodologies in order to maximize its use and decrease the cost for each sample. It was made using 10 adult and healthy goats and blood samples were taken through venipuncion in jugular vein, using 10mL tubes, and then a 500L sample was taken in eppendoff tubes with 2L of heparin. Using this sample were made three methodologies for the NBT test: A) Park & Good (1970) original technique; B) dye reduction in 50% of the volume; C) 50% reduction and dye storage at -20°C for 180 days. It was made and dyed the blood smear (May Grünwald-Giemsa) from the samples, using the proposed methodologies and then made the counting of 100 neutrophils in optic microscopy, to determinate the percentage of NBT reactive neutrophils. The statistic analysis by the method of Repeated Measuring Analysis (ANOVA) evinced significant differences (P 0,05) between the two methods and the original (A=14.4±4.6; B=1.9±1.4; C=1.1±0.9), however it showed high correlation by the Spearman test between the methods (rs=0,82 (AxB), rs=0,75 (BxC) e rs=0.93 (AxC)). It was concluded that the original Park & Good (1970) method and two methodologies for dye reduction in 50% and it's reduction associated with NBT dye freezing for 180 days can be used in caprines, but the values should be compared with their respective methodologies.

Resumo: O teste de redução do tetrazólio nitroazul (NBT) é um dos métodos mais utilizados para a avaliação do metabolismo oxidativo dos neutrófilos. Porém, o custo por amostra e o tempo de utilização do corante são desvantagens do método. O objetivo deste trabalho foi comparar duas metodologias para realização do teste do NBT a fim de maximizar a sua utilização e diminuir o custo por amostra processada. Foram utilizadas 10 cabras, adultas clinicamente sadias e colhidas amostras de sangue por meio de venipunção jugular em tubos de 10mL sendo retirada uma alíquota de 500L em tubo "eppendorff" contendo 2L de heparina. Através desta alíquota foram realizadas três metodologias para o teste do NBT: A) técnica original Park & Good (1970); B) redução de 50% do volume do corante; C) redução de 50% e armazenamento do corante a -20°C por 180 dias. Foram confeccionados e corados esfregaços sanguíneos (May Grünwald-Giemsa) das amostras com as metodologias propostas e realizada contagem de 100 neutrófilos em microscopia óptica para determinar o percentual de neutrófilos reativos ao NBT. A análise estatística pelo método de Análise de Medidas Repetida (ANOVA) demonstrou diferenças significativas (P 0,05) entre os dois métodos e o original (A=14,4±4,6; B=1,9±1,4; C=1,1±0,9), porém apresentou alta correlação pelo teste de Spearman entre os métodos (rs=0,82 (AxB), rs=0,75 (BxC) e rs=0,93 (AxC)). Conclui-se que o teste de Redução do Tetrazólio Nitroazul (NBT) segundo a metodologia descrita por Park & Good (1970) e a redução do corante em 50% do seu volume e a sua redução associada ao congelamento por 180 dias a -20ºC podem ser realizadas em caprinos, porém os valores devem ser comparados com as respectivas metodologias utilizadas.

Metabolismo oxidativo e cardíaco de equinos submetidos a exercício de baixa intensidade antes e após suplementação com antioxidante / Oxidative and cardiac metabolism of horses subjected to low intensity exercise before and after antioxidant supplementation

O presente estudo objetivou avaliar os marcadores cardíacos e de lipoperoxidação em equinos no teste de exercício de baixa intensidade e longa duração (TLD), antes e após a suplementação com vitamina E. Para tanto, foram utilizados 10 equinos, submetendo-os ao primeiro TLD, com carga de trabalho fundamentada no consumo máximo de oxigênio individual (VO2max). Em seguida, durante 59 dias, os equinos receberam vitamina E (dl-alfa-tocoferol) na dose diária de 1.000UI por via oral e, posteriormente, realizaram um segundo TLD com o mesmo protocolo do primeiro. As amostras de sangue foram colhidas para determinação do malondialdeído (MDA) plasmático, como índice de lipoperoxidação, da concentração sérica de troponina I cardíaca (cTnI) e da isoenzima MB da creatinoquinase (CK-MB) como marcadores cardíacos. Como efeito do exercício, não se observou aumento significativo de MDA nem de cTnI, mas sim da concentração sérica de CK-MB, sugerindo-se o estresse miocárdico. A suplementação foi capaz de amenizar a produção de espécies reativas de oxigênio, evidenciada pela menor concentração de MDA em todos os momentos avaliados, porém não causou efeito protetor no miocárdio. Concluiu-se que o exercício de baixa intensidade e longa duração promoveu estresse miocárdico em equinos de forma leve e a suplementação com vitamina E reduziu a lipoperoxidação.

The present study aimed to evaluate cardiac and lipoperoxidation markers in horses subjected to low intensity and long duration (TLD) exercise test, before and after vitamin E supplementation. For this purpose, 10 horses were used, subjecting them to the first TLD with a workload based on individual maximal oxygen uptake (VO2max). Then, horses received vitamin E (dl-alpha-tocopherol) during 59 days at a daily oral dose of 1,000IU, and thereafter they performed a second TLD with the same protocol as the first. Blood samples were collected to determine plasma malondialdehyde (MDA) as an index of lipoperoxidation, serum cardiac troponin I (cTnI) and creatine kinase MB isoenzyme (CK-MB) as cardiac markers. As a result of the exercise, there was no significant increase in MDA or cTnI, but serum CK-MB increased suggesting myocardial stress. The supplementation was able to minimize reactive oxygen species production, as evidenced by lower concentrations of MDA at all times evaluated, but it didn't cause protective effect on the myocardium. It was concluded that the low intensity and long duration exercise promoted light myocardial stress in horses and vitamin E supplementation reduced lipoperoxidation.

Leucograma e metabolismo oxidativo de neutrófilos em cabras da raça Saanen nos períodos de gestação, parto e pós-parto / Leukocyte count and neutrophil oxidative burst in Saanen goats in the pregnancy, parturition and postpartum periods

O presente estudo teve como objetivo a avaliação do leucograma e do metabolismo oxidativo de neutrófilos em fêmeas caprinas da raça Saanen, nos períodos de gestação, parto e pós-parto. Amostras de sangue foram colhidas de 20 fêmeas nulíparas da raça Saanen, clinicamente sadias por venipunção jugular aos 49 (M1), 42 (M2), 35 (M3), 28 (M4), 21 (M5), 14 (M6), sete (M7), três (M8) dias antes do parto, no dia do parto (M9), três (M10) e sete (M11) dias após o parto, para a realização do leucograma e dosagens séricas de cortisol, estradiol e progesterona. A partir de 28 dias (M4) antes do parto até sete dias do pós-parto (M11) foram colhidas amostras de sangue para a avaliação do metabolismo oxidativo de neutrófilos por meio do teste de redução do tetrazólio nitroazul (NBT). Os resultados demonstraram que no dia do parto houve aumento nas concentrações séricas de cortisol e estradiol, e diminuição da progesterona, leucocitose por neutrofilia e desvio à esquerda leve, diminuição dos linfócitos, aumento da relação neutrófilo:linfócito, eosinopenia, monocitose e basofilia. No sétimo dia do pós-parto houve leucocitose por neutrofilia e aumento da relação neutrófilo:linfócito. Não houve nos períodos de gestação, parto e pós-parto alterações significativas no metabolismo oxidativo dos neutrófilos. Conclui-se que o parto determina elevação da concentração sérica de cortisol e estradiol, e diminuição da progesterona determinando quadro de leucocitose por neutrofilia e desvio à esquerda leve, com diminuição dos linfócitos, aumento da relação neutróflo:linfócito, eosinopenia, monocitose e basofilia. Ao sétimo dia do pós-parto há leucocitose por neutrofilia, aumento da relação neutrófilo:linfócito e do fibrinogênio. A gestação, o parto e o período do pós-parto não alteram o metabolismo oxidativo de neutrófilos avaliado por meio do teste de redução do NBT.

The purpose of this study was to evaluate the leukocyte count and the oxidative metabolism of neutrophil in Saanen goats during periods of pregnancy, parturition and postpartum. Were used 20 Saanen goats, clinically healthy and serologically negative for caprine arthritis encephalitis virus (CAEV). Blood samples were collected by jugular venipuncture 49 (M1), 42 (M2), 35 (M3), 28 (M4), 21 (M5), 14 (M6), seven (M7), three (M8) days before the parturition, on the day of birth (M9), three (M10) and seven (M11) days postpartum, for the leukocyte count, and serum for cortisol, estradiol and progesterone determination. From 28 days (M4) before parturition until seven days postpartum (M11) blood samples were collected for evaluation of oxidative metabolism of neutrophils by the nitroblue tetrazolium reduction test (NBT). The results showed that at parturition day there were an increase in cortisol and estradiol levels and a decrease in progesterone serum, neutrophilic leukocytosis and left shift slight, decrease of lymphocytes, increase in the neutrophil: lymphocyte, eosinopenia, monocytosis and basophilia. There was a neutrophilic leukocytosis and an increase in the neutrophil: lymphocyte on the seventh day postpartum. There were not significant alterations in oxidative metabolism of neutrophils during pregnancy, parturition and postpartum. It was concluded that parturition causes an elevation in cortisol and estradiol levels and a decrease in progesterone serum determining a neutrophilic leukocytosis and left shift slight, with a reduction of lymphocytes, increase in the neutrophil:lymphocyte, eosinopenia, monocytosis and basophilia. Neutrophilic leukocytosis, increase in the neutrophil: lymphocyte and fibrinogen are detected on the seventh day postpartum. Pregnancy, parturition and the postpartum do not change the oxidative metabolism of neutrophils evaluated by NBT reduction test.

O treinamento nos valores da V200, FCpico e distância percorrida de cavalos da raça Árabe e Crioula / Training in V200, HRpeak and worked distance values in Arabian and Criollo horses

Avaliou-se o efeito do treinamento em esteira sobre a velocidade na qual a frequência cardíaca (FC) atinge o valor de 200 batimentos por minuto (V200), frequência cardíaca pico (FCpico) e sobre a distância percorrida em duas raças de equinos com aptidões diferentes. Para tanto, foram utilizados cinco equinos adultos da raça Árabe (GA) e cinco da raça Crioula (GC), submetidos ao teste padrão de exercício progressivo (TPEP) com inclinação da esteira de 6%, velocidade inicial de 1,8m s-1 por 5 minutos, fases a 4m s-1 por 3 minutos, a 6m s-1 por 2 minutos e fases a 8m s-1, 9m s-1, 10m s-1 e 11m s-1 por 1 minuto cada, até os cavalos não acompanharem a velocidade da esteira, mesmo sendo estimulados. A V200 de cada cavalo foi determinada através da regressão linear da FC versus a velocidade antes (M0) e após o treinamento (M1). O consumo máximo de oxigênio (VO2max) individual foi determinado para o cálculo da carga de trabalho nas nove semanas de treinamento, sendo cinco semanas com a carga de 35% VO2max, duas a 50% VO2max e duas a 100% VO2max. Os exercícios foram realizados uma vez por dia, cinco dias por semana e com inclinação de 6%. A média da V200 antes do treinamento (M0) foi 7,4±0,5 e 7,4±1,2m s-1, para o GA e GC, respectivamente, e após o treinamento (M1) foi 7,8±0,8 e 7,0±0,7m s-1, para o GA e GC, respectivamente. A média da FCpico no M0 foi 221,6±9,0 e 207,4±7,3bpm para o GA e GC, respectivamente, e no M1 foi 226,0±8,4 e 215,0±7,7bpm, para o GA e GC, respectivamente. A distância percorrida em metros no M0 foi de 3.391,0±252,0 e 2.446,0±96,3m para o GA e GC respectivamente, e no M1 foi de 3.850,8±462,2 e 2.698,6±335,8m para o GA e GC, respectivamente. Para a V200, não foram observadas diferenças significativas entre os grupos (P=0,4643) e os momentos (P=1,0). Para a FCpico, houve diferença estatística entre os grupos (P=0,0064), mas não entre os momentos (P=0,1348) . Para a distância percorrida, houve diferença estatística entre os grupos (P=0,0002) e entre os momentos (P=0,0092). Provavelmente, o treinamento condicionou os equinos a antecipar o exercício quando encaminhados à esteira, elevando a FC e influenciando nos valores da V200. Conclui-se que a V200 foi ineficaz para a constatação de diferenças no desempenho atlético entre as duas raças e para avaliação do efeito do treinamento em esteira. Demonstrando a necessidade da associação de outros índices de desempenho como a distância percorrida para assegurar a devida interpretação do efeito de programas de treinamento sobre o desempenho de equinos em testes físicos de exercício.

The effects of a training program on V200, HRpeak and worked distance were evaluated in two horse breeds with distinct aptitudes. Five Arabian (GA) and five Crioulo (GC’) adult horses were subjected to incremental exercise tests on a 6% slope, which consisted of 5 minutes at 1.8m s-1, 3 minutes at 4m s-1, 2 minutes at 6m s-1, then 1 minute steps at 8m s-1, 9m s-1, 10m s-1 and 11m s-1 or until the horse could not keep up the speed even being encouraged. V200 was achieved through linear regression analyses of heart rate vs. speed. Individual maximum oxygen uptake (VO2máx) was determined to establish speed during 9 weeks of training, being 35% of the VO2máx for 5 weeks, 50% for 2 weeks, and 100% for two additional weeks. Horses were exercised once a day, for 5 days a week, on a 6% slope. Mean V200 before training (M0) was 7.4±0.5m s-1 and 7.4±1.,2m s-1, for GA and GC, respectively, and after training (M1) was 7.8±0.8m s-1 and 7.0±0.7m s-1, for GA and GC, respectively. Mean HRpeak at M0 was 221.6±9.0 and 207.4±7.3 for GA and GC, respectively, and 226.0±8.4 and 215.0±7.7 at M1,for GA and GC respectively. Worked distance at M0 was 3391.0±252.0 and 2446.0±96.3 for GA e GC respectively, and at M1 was 3850.8±462.2 and 2698.6±335.8 for GA and GC respectively. No significant differences were observed between groups (P=0.4643) or moments (P=1.0) for V200. To HRpeak. there was statistical difference only between groups (P=0.0064). For the index of the distance traveled there was statistical difference between groups (P=0.0002) and moments (P=0.0092). Training probably conditioned horses to anticipate exercise when taken to the treadmill, therefore increasing heart rate and being an influence on V200 values. V200 was considered ineffective to assess differences in athletic performance between breeds and to evaluate the effect of treadmill training. Therefore it is necessary to associate other performance indicators as the distance to ensure appropriate interpretation of training effect programs on equine performance.

Efeito da idade e sexo sobre a concentração sérica de eritropoietina em equinos da raça Árabe / Effect of age and gender about the serum concentration of eritropoetin in Arabian horses

A EPO é um fator de crescimento glicoprotéico sintetizado pelas células adjacentes aos túbulos proximais renais regulada via mecanismo de "feed back" envolvendo a tensão de oxigênio tissular. Na baixa tensão de oxigênio arterial, a produção de EPO aumenta causando uma maior produção de eritrócitos na medula óssea. Devido ao pouco conhecimento da concentração de EPO sérica em equinos e a ausência de trabalhos sobre o efeito da idade e sexo sobre a sua concentração o trabalho teve como objetivo comparar a concentração sérica de eritropoietina em equinos da raça Árabe de sexos e idades diferentes. Foram utilizados 31 equinos da raça Árabe, com idades de seis a 12 meses (jovens) e acima de 24 meses (adultos), sendo 13 machos (seis jovens e sete adultos) e 18 fêmeas (oito jovens e 10 adultas), clinicamente sadios. As amostras de sangue foram colhidas por venipunção jugular e o soro armazenado até o momento do processamento. A concentração sérica de eritropoetina foi determinada pelo método de radioimunoensaio (RIA) utilizando kit comercial (EPO Trac TM125I RIA, Diagnostic Systems Laboratories, Webster, Texas, USA). Para análise estatística dos dados utilizou-se o Teste t de Student ao nível de 5% de significância (P<0,05). Não foram observadas diferenças significativas (P<0,05) quando se compararam os animais divididos entre sexos e as idades de seis a 12 meses (jovens) e acima de 24 meses (adultos). Conclui-se que a concentração de eritropoietina em equinos da raça Árabe independe do sexo e idade, e pode ser utilizada como valores de referência, porém ressalta-se a necessidade da obtenção de valores de referência para cada laboratório.(AU)

The erythropoietin (EPO) is a glicoproteic grow factor synthesized by the adjacent cells in the proximal renal tubes and controlled by feedback mechanism that involve the tension of tissular oxygen. In the presence of low tension of arterial oxygen, the production of EPO increases and it causes a major production of erythrocytes in the marrowbone. Due to poor knowledge of the serum concentration of erythropoietin in equines and the absence of information about the differences between age and gender, the aim of this study was to compare the serum concentration of erythropoietin in Arabian horses, clinically healthy with different age and gender. A total of 31 horses were used from 6 to 12 months old (young) and over 24 months old (adult), 13 males (six young and seven adult) and 18 females (eight young and ten adult) clinically healthy. Blood samples were collected from jugular vein using a vacuntainer with blood clot gel activator and the serum was separated by centrifugation and stored until the time of processing. The EPO serum concentration was measured by radioimmunoassay method (RIA) using a commercial kit (EPO Trac TM125I RIA, Diagnostic Systems Laboratories, Webster, Texas, USA). For statistical analysis of data were used the Student t test at 5% level of significance (P<0.05). It was not observed any statistic differences (P<0.05) between the sex and age of the animals from 6 to 12 months old and over of 24 months. We concluded that the concentration of the EPO in Arabian equines is independent of the sex and age, and can be used as reference values however it is very important and necessary to obtain references values for each laboratory.(AU)

Eritrograma, metabolismo do ferro e concentração sérica de eritropoetina em fêmeas caprinas da raça Saanen nos períodos de gestação, parto e pós-parto / Erithrogram, iron metabolism and serum erythropoietin concentration in female Saanen caprine in the pregnancy, parturition and postpartum periods

As alterações hematológicas durante o período de gestação, parto e pós-parto são de grande importância em humanos e têm sido estudadas em várias espécies de animais domésticos. O objetivo do trabalho foi determinar as alterações no eritrograma, no metabolismo do ferro e na concentração sérica de eritropoetina durante os períodos de gestação, parto e pós-parto em fêmeas nulíparas Saanen. Foram colhidas amostras de sangue de 20 fêmeas, clinicamente sadias, aos 49 (M1), 42 (M2), 35 (M3), 28 (M4), 21 (M5), 14 (M6), sete (M7), três (M8) dias antes do parto, no dia do parto (M9), três (M10) e sete (M11) dias após o parto, para a realização do eritrograma, proteína plasmática total, e dosagens séricas de eritropoetina, ferro, capacidade total de ligação do ferro, índice de saturação da transferrina e ferritina. Os dados foram analisados pelo teste de análise de variância (ANOVA) ao nível de 5 por cento de significância (P<0,05). Houve diferença significativa (P<0,05) entre alguns momentos para as variáveis, número de eritrócitos, concentração de hemoglobina, volume globular, proteína total plasmática, concentração de ferro sérico, capacidade total de ligação do ferro (CLTF) e índice de saturação da transferrina (IST). Não houve diferença significativa (P<0,05) para as variáveis eritropoetina, volume corpuscular médio (VCM), hemoglobina corpuscular média (HCM), concentração de hemoglobina corpuscular média (CHCM), distribuição do diâmetro dos eritrócitos (DDE) e ferritina. Concluiu-se que não há aumento do estímulo para a produção de eritrócitos durante os períodos de gestação, parto e pós-parto em fêmeas Saanen e as alterações encontradas no eritrograma e no metabolismo do ferro não possuem significado clínico.

Hematological changes during the pregnancy and parturition are of great importance in humans and have been studied in several species of domestic animals. The objective was to determine changes in erythrogram, iron metabolism and the serum concentration of erythropoietin in nuliparous female Saanen caprine during periods of pregnancy, parturition and postpartum. Blood samples were collected from 20 goats, clinically healthy, the 49 (M1), 42 (M2), 35 (M3), 28 (M4), 21 (M5), 14 (M6), seven (M7), three (M8) days in the pregnancy, parturition (M9), three (M10) and seven (M11) days postpartum for the erythrogram, plasma total protein and the serum of erythropoietin, iron, total iron binding capacity, transferrin saturation index and ferritin determination. The data were analyzed by analysis of variance (ANOVA) at 5 percent level of significance (P<0,05). Significant difference (P<0,05) between a few moments for the variables, erythrocytes count, hemoglobin concentration, packed cell volume, total plasma proteins, serum iron concentration, total iron binding capacity (TIBC) and transferrin saturation index (TSI) determination. There were no significant difference for the variables erythropoietin, mean cell volume (MCV), mean cell hemoglobin (MCH), mean cell hemoglobin concentration (MCHC), red cell distribution width (RDW) and ferritin. In conclusion, there was no stimulus for the increasing of the red blood cells production during the periods of pregnancy, parturition and postpartum in nuliparous Saanen goats. No clinical significance was observed in the in red blood cell count and in the iron metabolism.

Malondialdeído e troponina I cardíaca em equinos da raça Puro Sangue Árabe submetidos ao exercício e à suplementação com vitamina E / Malondialdehyde and cardiac troponin I in Arabian horses subjected to exercise and vitamin E supplementation

Para avaliar o efeito do exercício físico, do treinamento e da suplementação com vitamina E sobre o malondialdeído (MDA) e a troponina I cardíaca (cTnI) séricos, foram utilizados 16 equinos da raça Puro Sangue Árabe, sem treinamento, divididos em dois grupos de oito: controle e suplementado com vitamina E. Ambos os grupos foram submetidos a provas de exercício progressivo em esteira de alta velocidade inclinada a +7 por cento, antes (P1) e após (P2) o período de treinamento de 20 dias. Foram determinadas as concentrações séricas de MDA, vitamina E e cTnI e realizou-se o eletrocardiograma de repouso antes e após as provas P1 e P2. Os resultados sugerem a ocorrência do estresse oxidativo ocasionado pelo exercício, determinado por meio do aumento de MDA sérico. Em alguns animais, houve um discreto aumento de cTnI associado à detecção de complexos ventriculares prematuros, mas que não representou lesão cardíaca expressiva. Não houve efeito do treinamento sobre o estresse oxidativo. Portanto, é possível concluir que o exercício físico progressivo promoveu a lipoperoxidação nessas condições, que não foi prevenida pela suplementação com vitamina E nem pelo treinamento, mas não foi suficiente para causar uma lesão cardíaca significativa.

To evaluate the effect of exercise, training and vitamin E supplementation on serum malondialdehyde (MDA) and cardiac troponin I (cTnI), sixteen adult untrained Arabian horses were divided into 2 groups of 8 animals each, control and supplemented with vitamin E. Both groups had incremental exercise tests performed on a high-speed treadmill at a +7 percent slope, before (P1) and after (P2) a training period of 20 days. Serum concentrations of MDA, vitamin E and cTnI, and resting electrocardiogram were performed before and after P1 and P2. Results suggested that oxidative stress was induced by exercise as measured by serum MDA increase. In some animals, there was a subtle increase in cTnI concentration associated with the detection of ventricular premature complexes, which didn't represent a significant cardiac injury. There was no training effect on oxidative stress. It was concluded that, under the conditions above, the incremental exercise promoted lipoperoxidation, which was not prevented by vitamin E supplementation or training, however, it was not enough to cause a significant cardiac damage.

Metabolismo do ferro em equinos atletas / Iron metabolism in athletics horses

O ferro participa de várias funções vitais do organismo, como o transporte de oxigênio e de elétrons e a síntese do DNA. Desequilíbrios do metabolismo do ferro podem estar relacionados a sua deficiência ou sobrecarga, porém a deficiência é rara em equinos adultos. Apesar disso, criadores e veterinários de cavalos de esporte utilizam frequentemente suplementos contendo ferro com o objetivo de melhorar o desempenho atlético. Até o momento, nenhum estudo comprovou que o exercício induz deficiência de ferro nessa espécie ou que a suplementação de ferro melhora o seu desempenho. O diagnóstico de deficiência ou sobrecarga de ferro depende de uma avaliação laboratorial criteriosa. A suplementação em equinos não deficientes pode induzir o acúmulo excessivo de ferro, com graves consequências para o animal. Este trabalho revisa as alterações do metabolismo do ferro em equinos submetidos ao exercício, os métodos laboratoriais de avaliação dos estoques de ferro e as consequências da suplementação indevida.

Iron participates in many vital functions, e.g. oxygen and electron transport, and DNA synthesis. Iron metabolism imbalances can be related to deficiency or overload; however, the deficiency is rare in adult horses. Despite this, breeders and veterinarians usually supplement horses with iron, aiming to improve athletic performance. Until now, no study proved that exercise induces iron deficiency in this species or that iron supplementation improves its performance. Diagnosis of iron deficiency or overload depends on a comprehensive laboratorial evaluation. Supplementation in horses without disabilities can induce excessive iron storage, with serious consequences for the animal. This study reviews the iron metabolism alterations in equine submitted to exercise, laboratorial methods for the evaluation of iron storage, and consequences of improper supplementation.

Marcadores cardíacos na medicina veterinária / Cardiac markers in veterinary medicine

Os marcadores cardíacos são utilizados com o intuito de auxiliar no diagnóstico clínico de animais com doença cardíaca com maior acurácia e em menor tempo possível, possibilitando o estabelecimento do prognóstico e a terapia precocemente. Entretanto, em medicina veterinária, no Brasil, sua aplicabilidade ainda é, em geral, restrita a pesquisas. Esta revisão tem como objetivo abordar os principais marcadores cardíacos para que futuramente estes possam se tornar índices essenciais na avaliação cardíaca.

Cardiac markers have been used in order to assist clinical diagnosis of animals with heart disease, more accurately, enabling the establishment of earlier prognosis and therapy. However, in Brazilian veterinary medicine, these markers are generally still restricted to researches. This review aims to approach the major cardiac markers, which further may become essential indexes in heart assessment.

Perfil eletroforético e concentração de imunoglobulinas G (IgG) do soro sanguíneo de cabras Saanen com mastite experimental induzida por Staphylococcus aureus suplementadas com vitamina E / Electrophoretic profile and concentration of immunoglobulins G (IgG) in blood serum of Saanen goats with experimental mastitis induced by Staphylococcus aureus suplemented with vitamin E

O objetivo do trabalho foi avaliar o perfil eletroforético das proteínas e a concentração sérica de imunoglobulina G (IgG) em cabras da raça Saanen com mastite induzida experimentalmente por Staphylococcus aureus e suplementadas com vitamina E (acetato de dl-α-tocoferol). Utilizaram-se 14 cabras adultas, gestantes, primíparas, com sorologia negativa para Artrite Encefalite Caprina (CAEV), clinicamente sadias, divididas em dois grupos experimentais de sete animais. Grupo não suplementado (G1) e grupo suplementado com 2.000 U.I. de acetato de dl-α-tocoferol (G2 Vit E) via intramuscular no dia do parto e sete dias após o parto. Ao nono dia do pós-parto foram inoculados 300 UFCs da cepa de S. aureus ATCC 225923, na metade esquerda da glândula mamária de cada animal. A mastite foi determinada pela colheita das amostras de leite para a comprovação da infecção, por meio de exames bacteriológicos, contagem de células somáticas (CCS) e California Mastitis Test (CMT), a partir deste momento foram efetuadas colheitas às 12, 24, 48 e 72 horas, sendo posteriormente instituído o tratamento intramamário com antimicrobiano e nova avaliação 48 horas após o tratamento. O perfil eletroforético em gel de agarose das proteínas séricas das cabras, apresentaram cinco frações, sendo: albumina e globulinas (α, β1, β2 e γ). Houve aumento na produção de γ-globulina e menor produção da fração β2-globulina 12 horas após a infecção, com os valores reduzindo mais rapidamente no grupo suplementado, evidenciando a influência da vitamina E na diminuição da produção das proteínas de fase aguda. Não houve influência da vitamina E na concentração sérica de imunoglobulina G (IgG) nos animais suplementados. A suplementação com vitamina E aumentou a concentração de imunoglobulinas e diminuiu a produção de proteínas de fase aguda, provavelmente pelo efeito antioxidante minimizando a lesão tecidual durante o processo inflamatório localizado ...

The objective was to evaluate the electrophoretic profile of proteins and serum concentration of immunoglobulin G (IgG) in Saanen goats with mastitis experimentally induced by Staphylococcus aureus (dl-α-tocopherol acetated). 14 adult goats, (supplemented with vitamin E DL-α-tocopherol) primiparous pregnant, seronegative for caprine arthritis encephalitis (CAEV), clinically healthy, were divided into two groups of seven animals: Not supplemented group (G1) and group supplemented with 2.000 UI of DL-α-tocopherol (G2 Vit E), by intramuscular injection on the day of the parturition and seven days later. At the 9th day after delivery 300 UFCs of the S. aureus ATCC 225923 strain were inoculated into the left half of the mammary gland of each animal. The mastitis was determined through collection of milk samples for evidence of infection by means of bacteriological examination, somatic cell count (SCC) and California Mastitis Test (CMT). Then samples were collected after 12, 24, 48 and 72 hours, antimicrobial intra-mammary gland treatment was initiated, with new evaluation 48 hours after treatment. The electrophoretic profile of serum protein of the goats, showed five fractions, as follows: albumin and globulin (α, β1, β2 e γ-globulin). There was an increase in the production of γ-globulin and lower production of β2-globulin fraction 12 hours after infection, and faster decrease in the supplemented group, showing the influence of vitamin E in the production of acute phase proteins. There was no influence of vitamin E in the serum concentration of immunoglobulin G (IgG) in supplemented animals. The supplementation with vitamin E increased the concentration of immunoglobulin and decreased the production of acute phase proteins, probably the antioxidant effect minimizing the tissue injury during the inflammatory process in the mammary gland.

Perfil eletroforético das proteínas séricas de serpentes Crotalus durissus terrificus (cascavel) criadas em cativeiro / Serum protein electrophoresis profile of the rattlesnake Crotalus durissus terrificus kept in captivity

As serpentes peçonhentas dos gêneros Bothrops e Crotalus têm sido mantidas em cativeiro visando à extração de venenos para a produção de imunobiológicos. O conhecimento da fisiologia desses animais e as alterações na concentração de proteínas e suas frações séricas são importantes para a identificação precoce de importantes enfermidades que cursam com estados de hipoproteinemia e hiperproteinemia. O objetivo do trabalho foi determinar a concentração de proteína total e o perfil eletroforético das proteínas séricas de serpentes Crotalus durissus terrificus (cascavel) criadas em cativeiro. Foram colhidas amostras de sangue da veia coccígea ventral de 21 serpentes adultas e sadias, divididas em dois grupos: Grupo 1 de 12 machos com peso médio de 588,89±193,55g, e Grupo 2 de nove fêmeas com peso médio de 708,33±194,04g. A proteína total sérica foi determinada pelo método de refratometria e a eletroforese em gel de agarose. Obtiveram-se valores da proteína total sérica (g/dL) de 4,51±0,50 para machos e de 4,82±0,72 para fêmeas, e para machos e fêmeas de 4,64±0,61. Foram identificadas pela eletroforese quatro frações protéicas (g/dL): albumina, a, b, g-globulinas e calculada a relação albumina:globulina. As serpentes fêmeas apresentaram maiores valores para as variáveis, albumina e para a relação albumina/globulina (AG) diferindo significativamente (P<0,05) do grupo de machos, porém sem significado clínico.

The poisonous snakes of the genera Crotalus and Bothrops have been kept in captivity with the purpose of extracting poison for the production of immunobiological. Knowledge of the physiology of these animals and serum proteins concentration changes are important for early identification of major diseases which lead to states of hypoproteinemia and hyperproteinemia. The objective was to determine the concentration of total protein and serum protein electrophoresis profile of Crotalus durissus terrificus (rattlesnake) in captivity. Blood samples were taken from the ventral coccygeal vein of 21 adult and healthy snakes divided into groups: Group 1 with 12 males, weighing in average 588.89±193.55g, and Group 2 with nine females, weighing in average 708.33±194.04g. The total serum concentration of protein was determined by the method of refractometry and agarose gel electrophoresis. The total protein values in the serum for females was 4.82±0.72, for males 4.51±0.50 and males and females 4.64±0.61, identified by four fractions (g/dL): albumin, a, b and g-globulin. Additionally the albumin/globulin ratio was calculated. The female snakes showed higher values for the variables, albumin and the albumin/globulin (AG) differed significantly (P<0.05) from the group of male snakes, but there was no clinical significance.

Leucemia linfocítica crônica em cão: relato de caso / Chronic lymphocitic leukemia in dog: case report

O presente relato refere-se a um caso de leucemia linfocítica crônica (LLC) diagnosticada no Hospital Veterinário da FMVZ - UNESP, Campus de Botucatu, em um cão da raça Doberman, fêmea, com nove anos e oito meses de idade que apresentava anorexia e histórico de dificuldade locomotora. Ao exame físico observou-se hepato e esplenomegalia. O diagnóstico foi baseado nos resultados do hemograma (hemácias: 2,4 x 106/mL; hemoglobina: 5,6g/dL; hematócrito: 16 por cento), linfocitose (40,1 x 103/mL) e trombocitopenia (32,5 x 103/mL) e no exame citológico da medula óssea onde se observou celularidade aumentada com hipoplasia severa das séries megacariocítica, mielóide e eritróide. A série linfóide apresentou-se marcadamente aumentada, sendo representada principalmente por linfócitos pequenos e médios e em menor grau por plasmócitos.

Chronic lymphocytic leukemia (CLL) was diagnosed in a 9-year-old-female Doberman Pinscher presented to the hospital of FMVZ - UNESP, Botucatu with anorexia and locomotion abnormalities. Clinical examination revealed hepato and splenomegaly. The diagnose was based on CBC results which showed anemia (RBC 2.4 x 106/mL; hemoglobin 5.6g/dL; PCV 16 percent), lymphocytosis (40.1 x 103/mL) and thrombocytopenia (32.5 x 103/mL) and in bone marrow evaluation which showed increased cellularity with severe myeloid, erythroid and megakaryocytic hypoplasia. The lymphoid series was marked increased, represented mainly by small and medium lymphocytes and occasional plasma cells.

Proteinograma e exame coproparasitológico de ovelhas das raças Ideal e Suffolk durante o periparto

O parasitismo por nematódeos gastrointestinais é, provavelmente, o mais importante fator que afeta a produtividade emfazendas de criação de ovinos, sendo observado principalmente durante a gestação e a lactação. Com o objetivo de avaliar asalterações do proteinograma em ovelhas naturalmente infectadas por parasitas gastrointestinais durante o período do periparto,coletaram-se, semanalmente, amostras de sangue e fezes de 42 ovelhas, sendo 18 da raça Ideal e 24 da raça Suffolk. Ascoletas foram realizadas em 12 momentos, sendo três no período do pré-parto (PP), seis durante a lactação (LA) e três noperíodo do pós-desmame (PD). A análise dos resultados demonstrou hipoproteinemia, com redução dos níveis séricos dealbumina e da relação albumina:globulina (A:G) e hiperglobulinemia apenas na raça Suffolk. A eletroforese das proteínasséricas revelou baixos níveis das frações b e g globulina, principalmente na raça Ideal. Os resultados do OPG revelaram altataxa de infecção por nematódeos, identificados pela coprocultura como sendo dos gêneros Haemonchus e em menor grauTrichostrongylus, Oesophagostomum e Cooperia. As alterações observadas neste experimento ocorreram durante o final dagestação e, principalmente, durante a lactação e estas foram mais evidentes nos animais da raça Ideal.

Platelet aggregation studies in acute experimental canine ehrlichiosis.

BACKGROUND: Thrombocytopenia is the most common and consistent hematologic finding in patients with canine monocytic ehrlichiosis. Dogs that recover from the severe thrombocytopenia still show bleeding tendencies, which suggest that platelet dysfunction is present. OBJECTIVES: The purpose of this study was to determine the occurrence and duration of platelet dysfunction in dogs with ehrlichiosis and to assess whether dysfunction is related to thrombocytopenia. METHODS: Ten adult male and female mongrel dogs were used in the study; 7 were inoculated intravenously with whole blood containing Ehrlichia canis, and 3 were used as controls. Platelet aggregation (with collagen/epinephrine and adenosine diphosphate (ADP)/epinephrine) and platelet counts were evaluated weekly for 112 days. RESULTS: The infected group showed a decrease in platelet aggregation response to collagen/epinephrine and ADP/epinephrine on days 7, 14, 21, 28, and 35 (P <.05). Thrombocytopenia was observed in all infected animals from day 7 to 35 postinfection (P <.05). CONCLUSIONS: The tendency of dogs infected with E canis to bleed may be related not only to thrombocytopenia but also to platelet dysfunction associated with the disease.

Valores da Amplitude de Distribuição do Tamanho dos Eritrócitos (RDW) em eqüinos Puro Sangue Inglês (PSI) submetidos a exercícios de diferentes intensidades / Values of Red Blood Cell Distribution Width (RDW) in thoroughbred horse submitted to exercise of different intensity

O presente estudo foi delineado para avaliar as alterações nos valores da amplitude de distribuição do tamanho dos eritrócitos (RDW) e do volume globular médio (VGM) em eqüinos PSI submetidos a exercícios de diferentes intensidades. Foram colhidas amostras de sangue de 60 eqüinos, PSI, sendo 30 machos e 30 fêmeas, distribuídos nos seguintes grupos: eqüinos de 24 a 36 meses de idade não submetidos a treinamento e após um período de 12 meses de treinamento; eqüinos de 36 a 48 meses de idade em fase de treinamento, antes e após o trote e antes e após o galope. As amostras foram processadas no contador automático de células Cell-Dyn 3500R (Abbott Diagnostic). Os valores médios obtidos para o RDW aumentaram significativamente após o trote e galope, demonstrando ocorrer alteração no grau de anisocitose porém os valores do VGM não apresentaram alterações nesses mesmos momentos.

In order to evaluate the influence of exercise of different intensities on Red Blood Cell Distribution width (RDW) and Packed Cell Volume (VG) in Thoroughbred horses, blood was collected from 60 animals, 30 males and 30 females, subdivided in groups of horses with 24 to 36 months of age and not in training, and after 12 months of training, and horses with 36 to 48 months of age in training. Blood samples where collected before and after trot and gallop. Samples where analyzed with a automatic cell counter (Cell-Dyn 3500R, Abbott Diagnostic). Red Blood Cell Distribution width (RDW) values increased significantly after trot and gallop demonstrating a variation in the size of red blood cells, while Packed Medium Cell Volume (VGM) values did not show variations before or after exercise.

Evaluation of neutrophil oxidative metabolism in canine monocytic ehrlichiosis.

BACKGROUND: Canine monocytic ehrlichiosis (CME) is a tick-borne disease caused by Ehrlichia canis, a rickettsia that infects the monocytes of dogs. This infection can result in a chronic and life-threatening disease. Thrombocytopenia, mild anemia, and leukopenia are the most common hematologic findings in CME. OBJECTIVE: To investigate the role of peripheral blood neutrophils in CME, an evaluation was conducted of their functional state during the acute phase of the disease in dogs experimentally infected by E canis. METHODS: Seven dogs were inoculated with E canis, and 3 remained as uninfected controls. All dogs had physical exams and hematologic tests (CBC and nitroblue tetrazolium [NBT] reduction) during a 6-week period. RESULTS: There was no difference (P > .05) in spontaneous NBT reduction results between the 2 groups of dogs throughout the 6-week period of observation. Nevertheless, when stimulated, the neutrophils showed higher activity in the infected group (P = .01) on weeks 4 and 5 after infection. CONCLUSION: Infection by E canis has no influence on neutrophil oxidative metabolism even though during the remission period of the acute phase of the disease, the neutrophils seem to be more reactive under stimulation.

Influência do desenvolvimento etário e da suplementação com vitamina E (acetato de DL-alfa-tocoferol) no metabolismo oxidativo dos neutrófilos de bovinos da raça Holandesa (Bos taurus) / Influence of age and vitamin E supplementation (DL-alpha-tocopherol acetate) on neutrophil oxidative metabolism in Holstein friesan (Bos taurus)

O presente trabalho teve por objetivo analisar a influência do desenvolvimento etário e da suplementação com acetato de DL-alfa-tocoferol sobre o metabolismo oxidativo de neutrófilos, em bovinos da raça holandesa, no período do nascimento até os 150 dias de idade. Foram utilizados 20 bezerros divididos em dois grupos de dez animais. Os animais do grupo Tratamento receberam 2000UI de acetato de DL-alfa-tocoferol, por via intramuscular, ao nascimento, aos 15, 30, 60, 90 e 120 dias de idade, sendo o outro o grupo Controle, que não recebeu qualquer suplementação. Em ambos os grupos, o metabolismo oxidativo dos neutrófilos demonstrou pouca atividade durante os primeiros 60 dias de vida, sendo indicativo da ineficiência deste importante mecanismo bactericida. Não foi observado efeito significativo da administração do acetato de DL-alfa-tocoferol sobre o metabolismo oxidativo de neutrófilos.

Tissue stages of Hepatozoon canis in naturally infected dogs from Sao Paulo State, Brazil.

A total of 222 dogs were examined by blood smear examination and Hepatozoon canis infection was detected in 13 dogs (5.9%). Five H. canis-infected dogs were necropsied to observe tissue stages in the organs. Fragments of spleen, liver, lungs, heart, kidneys, lymph nodes, bone marrow and skeletal muscles were used to made touch-impression smears. No macroscopic lesions were found in the organs. Two dogs had gamonts within polymorphonuclear cells and schizonts in various stages of development within the spleen and the bone marrow. Nevertheless, no mature meronts were found.